如果引物Tm零下5°C接近延伸温度(72°C),请考虑运行两步仪器仪表方案,退火温度不应超过延伸温度,变性温度过低:如果变性温度过低,DNA不会完全变性,扩增效率也会低,使用95°C的变性温度,变性太长:如果变性太长。
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